正交设计优化山茱萸ISSR-PCR反应体系研究-陕西师范大学学报期刊社网站

陕西师范大学学报（自然科学版）

生命科学

正交设计优化山茱萸ISSR-PCR反应体系研究

关锰，白成科，王吉吉之*

(教育部药用植物资源与天然药物化学重点实验室，陕西师范大学生命科学学院，陕西西安 710062)

关锰,男,硕士研究生,主要从事植物种质资源方面的研究.

摘要:

利用正交试验设计法，从引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度4种因素3个水平，对山茱萸ISSR-PCR反应体系进行优化分析，并在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测．结果表明，20 μL ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为：1×PCR buffer、150 μmol/L dNTP、1.0 μmol/L引物、2.5 mmol/L Mg2+和2.0 U TaqDNA聚合酶，最佳模板DNA浓度为20～80 ng，引物UBC835的最佳退火温度为57.2℃．

关键词：

生物技术；山茱萸；正交优化

收稿日期：

2007-04-20

中图分类号：

Q943.2

文献标识码：

文章编号：

1672-4291(2008)02-0080-05

基金项目：

国家“十一五”科技支撑计划项目（2006BAI06A12-04）；陕西省科技计划项目(2006K16-G2(3))

Doi:

Study on optimization for ISSR-PCR reaction system in Cornus officinalis using orthogonal design

GUAN Meng, BAI Cheng-ke,WANG Zhe-zhi

(Key Laboratory of Ministry of Education for Medicinal Plant Resource and Natural Pharmaceutical Chemistry, College of Life Sciences, Shaanxi Normal University, Xi′an 710062, Shaanxi, China)

Abstract:

The orthogonal design was used to optimize the ISSR-PCR amplification system of Cornus officinalis in four factors (the concentration of dNTP, Primers, Mg2+ and Taq DNA polymerase) at three levels respectively. Then, based on the optimal ISSR-PCR amplification system, the concentration of template DNA and annealing temperature were proposed by gradient PCR. The results showed that 1×PCR buffer, 150μmol/L dNTP, 1.0 μmol/L primer,2.5mmol/L Mg2+, 2.0 U Taq DNA polymerase and 20～80 ng template DNA in a total volume of 20 μL were suitable for ISSR-PCR amplification system of Cornus officinalis. The optimal annealing temperature for primer UBC835 is 57.2℃.

KeyWords:

biotechnology; Cornus officinalis Sieb.et Zucc.; orthogonal optimization